हाइब्रिडोमा कोशिकाओं को जोड़ने के लिए किसका उपयोग किया जाता है?
मोनोक्लोनल एंटीबॉडी तैयार करने के लिए हाइब्रिडोमा तकनीक मुख्य तरीकों में से एक है। मुख्य बात प्रतिरक्षा बी कोशिकाओं को मायलोमा कोशिकाओं के साथ जोड़कर हाइब्रिडोमा कोशिकाएं बनाना है। यह आलेख हाइब्रिडोमा कोशिकाओं के संलयन तरीकों, प्रमुख अभिकर्मकों और संचालन प्रक्रियाओं के आसपास एक संरचित विश्लेषण करेगा, और प्रासंगिक डेटा तुलना संलग्न करेगा।
1. हाइब्रिडोमा कोशिका संलयन की मुख्य विधियाँ
| संलयन विधि | सिद्धांत | लाभ | सीमाएँ |
|---|---|---|---|
| खूंटी-मध्यस्थता संलयन | पॉलीथीन ग्लाइकोल कोशिका झिल्ली को अस्थिर कर देता है | कम लागत और सरल ऑपरेशन | संलयन दर कम है (लगभग 1×10⁻⁵) |
| इलेक्ट्रोफ्यूजन विधि | उच्च-वोल्टेज पल्स कोशिका झिल्ली को छिद्रित कर देते हैं | उच्च संलयन दक्षता (80% तक) | उपकरण महंगे हैं और तकनीकी आवश्यकताएँ अधिक हैं |
| वायरस-मध्यस्थता संलयन | सेंडाई वायरस झिल्ली संलयन को प्रेरित करता है | प्राकृतिक संलयन प्रक्रिया | जैव सुरक्षा जोखिम, खराब प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता |
2. आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों की प्रदर्शन तुलना
| अभिकर्मक प्रकार | विशिष्ट उत्पाद | एकाग्रता | कार्रवाई का समय |
|---|---|---|---|
| खूंटी समाधान | PEG1500 | 50%(w/v) | 1-2 मिनट |
| इलेक्ट्रोफ्यूजन बफर | मैनिटोल समाधान | 0.3M | पल्स समय 10μs |
| स्क्रीनिंग मीडिया | HAT माध्यम | 1× | सतत प्रशिक्षण |
3. संचालन प्रक्रिया के मुख्य चरण
1.कोशिका पूर्व उपचार: प्रतिरक्षा प्लीहा कोशिकाओं और मायलोमा कोशिकाओं को 5:1 के अनुपात में मिलाया जाता है और सीरम प्रोटीन को हटाने के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है।
2.संलयन प्रतिक्रिया: धीरे-धीरे पीईजी समाधान जोड़ने के लिए ग्रेडिएंट सेंट्रीफ्यूजेशन विधि का उपयोग करें, और 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में प्रतिक्रिया समय को सटीक रूप से नियंत्रित करें।
3.चयनात्मक संस्कृति: हाइब्रिडोमा कोशिकाओं की स्क्रीनिंग के लिए एचएटी माध्यम (हाइपोक्सैन्थिन-एमिनोप्टेरिन-थाइमिडीन युक्त) का उपयोग करें।
4.क्लोनल संस्कृति: सीमित तनुकरण विधि के माध्यम से मोनोक्लोनल सेल लाइनें प्राप्त करें, और एलिसा द्वारा एंटीबॉडी स्राव का पता लगाएं।
4. तकनीकी अनुकूलन दिशा
| आयाम अनुकूलित करें | विशिष्ट उपाय | अपेक्षित प्रभाव |
|---|---|---|
| संलयन दक्षता | स्पंदित विद्युत क्षेत्र मापदंडों का अनुकूलन | 85% से अधिक की वृद्धि |
| कोशिका गतिविधि | एंटीऑक्सीडेंट जोड़ें | जीवित रहने की दर 30% बढ़ी |
| स्क्रीनिंग गति | स्वचालित क्लोन चयन | काम के घंटे 50% कम करें |
5. उद्योग में नवीनतम रुझान (पिछले 10 दिनों में हॉट स्पॉट)
1. "नेचर प्रोटोकॉल्स" की नवीनतम रिपोर्ट से पता चलता है कि माइक्रोफ्लुइडिक चिप फ्यूजन तकनीक का उपयोग करके हाइब्रिडोमा गठन दक्षता 90% से अधिक हो सकती है।
2. शंघाई की एक बायोलॉजिकल कंपनी ने एक नए प्रकार का इलेक्ट्रोफ्यूजन उपकरण जारी किया। इसका पेटेंट तरंगरूप डिज़ाइन कोशिका मृत्यु दर को 5% से नीचे नियंत्रित करता है।
3. सीआरआईएसपीआर जीन संपादन तकनीक को मायलोमा सेल लाइनों के परिवर्तन के लिए लागू किया जाना शुरू हो गया है, जिससे एंटीबॉडी स्राव की स्थिरता में काफी सुधार हुआ है।
संक्षेप में, हाइब्रिडोमा सेल फ़्यूज़न तकनीक उच्च दक्षता और मानकीकरण की दिशा में विकसित हो रही है। शोधकर्ताओं को प्रयोगात्मक आवश्यकताओं और उपकरण स्थितियों के आधार पर पारंपरिक पीईजी पद्धति और उभरती इलेक्ट्रोफ्यूजन तकनीक के बीच एक उचित विकल्प बनाने की आवश्यकता है।
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